Inseminación artificial en ovinos

Existen 2 métodos:

- Tradicional

- Con semen congelado (por laparoscopía)

INSEMINACIÓN ARTIFICIAL CON SEMEN CONGELADO

El espermatozoide ovino congelado tiene una vitalidad muy reducida, y en algunos casos, en los que no hay una vitalidad tan reducida, hay una muy baja capacidad de fertilización.

El glicerol perjudica al espermatozoide.

Los espermatozoides que descongelaban bien tenían baja capacidad fecundante porque tenían fallas, defectos o pérdida del acrosoma (que es como el radar de los esp.). Entonces, descongelaban con buena vitalidad pero eran incapaces de dirigirse al lugar de fecundación y penetrar la membrana pelúcida.

El otro inconveniente es por el cérvix de la oveja. Este es largo y sumamente tortuoso, lo que hace prácticamente imposible hacer progresar cánulas para llegar a la luz uterina.

Además, tampoco contamos con la ventaja del tacto rectal para poder dirigir el cérvix al canular.

Al poner los espermatozoides en el útero, los porcentajes de fertilización aumentan.

Antes se ponían los espermatozoides en el útero mediante laparotomía, pero esto no resultaba práctico, y además, si bien se lograba una buena fertilización de los ovocitos, las preñeces no progresaban debido al shock quirúrgico y al manoseo de las vísceras.

Luego se empezó a usar la laparoscopía, que resultó una técnica muy eficaz para realizar la deposición intrauterina de semen realizando únicamente un par de punciones. Es una técnica quirúrgica pero no es invasiva. Se han reducido riesgos y se pueden intervenir entre 100 y 120 animales en una jornada.

Se hace en animales con celos sincronizados. En las ovejas los celos se pueden sincronizar mediante la inyección de Prostaglandinas o por el método de los pesarios intravaginales (o esponjas). En este último método, se utilizan trozos de esponja embebidos en Medroxiprogesterona o Fluorogestona, que son colocados durante 12 a 14 días en la vagina de la oveja para provocar un alza de Progestágenos en sangre. Al retirar la esponja, engañamos a la hipófisis de la oveja y esta registra que hubo una caída de Progesterona en sangre, entonces libera FSH y LH, y el ciclo me queda sincronizado. Al momento que le sacamos la esponja le inyectamos una dosis de 300 a 500 U.I. de PMSG para ayudar a sincronizar también la ovulación.

A las 50 o 60 hs de retirada la esponja se hace la inseminación laparoscópica.

Esta técnica no sirve para ser utilizada en celos naturales porque estos se presentan entre un 3 y 4% por día en las ovejas de una majada.

Para el trabajo se necesitan 2 personas. La que insemina debe ser un veterinario, y la otra persona va descongelando el semen.

Si bien no está muy difundido debido a los costos, actualmente se están inseminando 2 a 3 mil ovejas cada año.

Puedo congelar semen de carneros de prueba de progenie, o de carneros de cabaña de calidad sobresaliente.

Dosis/animal: 40 millones de espermatozoides a la congelación; 20 millones a la descongelación.

Se colocan en pajuelas de 0,25.

De cada eyaculado de carnero se pueden sacar entre 70 y 80 dosis.

Como con esta técnica no debo pasar por cérvix, solo necesito poner una dosis de semen para lograr resultados adecuados. En otras técnicas en las cuales los espermatozoides deben pasar el cérvix, necesito colocar más de 120 millones de espermatozoides lo cual hace que necesite 3 dosis por animal, lo que me sube muchísimo los costos.

A las ovejas que van a ser inseminadas se las mantiene en ayuno de sólidos y líquidos durante 24 hs para tener el menor volumen ruminal posible. Aunque las ovejas se estresan un poco, es importante para la manipulación.

El celo se puede detectar o no antes de inseminar. El resultado del trabajo es mejor si los celos son detectados. Con la sincronización de celos con esponjas, obtengo entre 82 y 83% de efectividad (o sea que, de 100 ovejas a las que puse esponjas, unas 82 u 83 me van a ovular y son marcadas por retarjos).  

Se trabaja con un 10% de retarjos por el gran volumen de ovejas que están entrando en celo.

A las ovejas que vamos a inseminar les cortamos y depilamos la lana por delante de la ubre. Las colocamos en una camilla en la que van a quedar en la posición llamada Tren de Lemburg, cabeza abajo 45º para que las vísceras se desplacen hacia craneal y la entrada de la pelvis nos quede lo más libre posible. Desinfectamos la zona con alcohol yodado.

El equipo es una fuente de luz fría, un cable de fibras ópticas y un tanque de CO2 conectado al primer trocar. El tanque de CO2 nos va a permitir hacer un neumoperitoneo que nos va a hacer aparecer la cavidad del abdomen.

Primero se introduce el trocar del lado izquierdo. Pasamos el laparoscopio para verificar si estamos en cavidad abdominal y luego se introduce el segundo trocar por donde vamos a pasar la cánula de inseminación. Este segundo trocar tiene una llave para dejar pasar el CO2. El dolor está relacionado con la cantidad y la calidad del gas del neumoperitoneo. Si se trabaja con oxígeno se debe manejar más lentamente.

Se punciona un cuerno, se deposita la mitad de la dosis de semen, y luego se punciona el otro cuerno y se deposita la otra mitad de la dosis. Se puncionan los dos cuernos para no estar buscando donde se produjo la ovulación, para evitar el manoseo de órganos y evitar adherencias, etc.

Podemos inseminar 100 ovejas en 3 hs y media trabajando de manera continua.

La pared abdominal tiene una vascularización muy precaria. El vaso que tiene riesgo es la vena de drenaje mamario (la mayoría son muy visibles),

Existe el riesgo de puncionar el saco dorsal de rumen, pero como trabajamos con trocar piramidal lo único que tendríamos que hacer sería colocar antibióticos de amplio espectro y no inseminar a ese animal. 

Nos puede pasar que si las ovejas estuvieron mucho rato en el potrero, tengan la vejiga llena y la podamos puncionar. 

Pueden ocurrir muertes por punción de la terminación de la aorta cuando la oveja se mueve cuando colocamos el primer trocar.

Después se repasa con carnero.

El manejo posterior de las ovejas es importante porque el 12 o 14% de las que fueron fertilizadas no llegan a desarrollar embriones.

Si yo hago que un carnero me cubra a las hembras en un solo celo, el 60% de ellas queda preñada y la gestación progresa. Si utilizo esta técnica de inseminación con semen congelado, logro los mismos parámetros. 

INSEMINACIÓN ARTIFICIAL POR EL MÉTODO TRADICIONAL

Se usa en ovinos y en caprinos. Se usa mucho para aplicar técnicas nuevas o novedosas.

El objetivo de este método de inseminación es lograr el mayor porcentaje de preñez en la época de encarnerada, para lograr 2 corderos por año por hembra.     

Permite introducir rápidamente una raza netamente productora de carne. Últimamente se están queriendo introducir razas de lana más fina, entonces, en este caso en lugar de cambiar toda la majada por otra raza, puedo inseminar con machos de esas razas que quiero introducir. Para reproducir más de mil ovejas necesito solamente 1 o 2 padres.

La velocidad de imprimir cambios es mucho más rápida con inseminación que con la monta natural.

Ciclo normal de la oveja: 17 días es el promedio (entre 15 y 20 días).

Celo: dura entre 1 y 2 días. Lo normal es entre 20 y 36 horas, pero pueden durar hasta 2 días.

Ovulación: se produce a las 24 o 30 hs del comienzo del celo, cerca del final del celo.

Gestación: 5 meses.

Tenemos un periodo de metaestro, un diestro, y un proestro corto de un par de días que sirve de preparación para el próximo celo. De los 17 días de ciclo tenemos una fase luteal de alrededor de 11 o 12 días, con 5 días de fase folicular.

Las ovejas son estacionales. El elemento para que entre en celo es el acortamiento de las horas luz. La luz influye sobre la glándula pineal que a través de la melatonina va a desencadenar la entrada a la estación reproductiva. La primera ovulación es silenciosa porque se necesita un priming de 10 días de Progesterona para poder tener un celo de buenas características.  

Las razas de lana fina como el Merino, son más sensibles y entran en estación reproductiva antes que las razas de lana gruesa. Las Merino entran en Diciembre, las Ideal en Diciembre- Enero, las Corriedale en Febrero, y las Romney Marsh o Lincoln en Marzo o Abril.    

Con la sincronización de celo, podemos independizarnos de la estación reproductiva porque podemos crear un celo en la oveja disminuyendo el periodo de anestro estacional.

También es importante determinar en qué fecha van a nacer los corderos, para saber qué condiciones vamos a tener para atenderlos.

Organización de un trabajo de I.A. en ovinos:

A)Preparación del trabajo: se debe empezar a preparar 60 días antes para hablar con el productor y analizar algunas cosas (como la espermatogénesis dura entre 45 y 56 días, si revisamos 60 días antes podemos curar algún problema y recolectar semen al final de la estación reproductiva).

* Elección de la época: se elige junto con el productor y previendo la época de nacimientos y que condiciones le podemos ofrecer a los corderos.

* Instalaciones: Potreros (con buena alimentación, desparasitarlos vaciándolos durante un mes, porque allí vamos a tener a la majada durante los 45 días que dura la inseminación), Facilidades para la I.A. (bretes, tubo, local de inseminación protegidos del sol y la lluvia, pozo, cepos), Laboratorio (debe ser un lugar limpio), Instalaciones sociales (lugar donde nos vamos a quedar a dormir).

* Preparación de los carneros: Número de carneros (elijo 2, un titular y un suplente, el cual me va a dar semen cuando el otro esté en descanso o se lastime), Selección de los padres (selecciono los 2 mejores sea por lana, raza, comportamiento individual, etc. teniendo sobretodo en cuenta el estado fisiológico), Examen clínico exhaustivo, Colección de semen y Espermiograma (se realizan 3 colecciones de semen 60 días antes y se hace un examen andrológico completo; debemos tener cuidado de que no estén en el llamado anestro estacional, porque en ese caso producen menos semen; también debemos tener cuidado con la llamada esterilidad de verano, que se produce cuando hace mucho calor, y los testículos, que deben estar 2 grados por debajo de la temperatura corporal sufren calor y la producción espermática se ve alterada; en cuanto a esto puedo tomar medidas 60 días antes y cortar o trasquilar la lana del escroto si mide más de 1 cm; no se esquila porque la lana actúa como aislante térmico e impide que penetre el calor, pero si hay mucha lana, las glándulas sudoríparas no pueden eliminar ese calor; también es conveniente poner a los animales en lugares tranquilos con sombra y agua), Entrenamiento (el animal debe acostumbrarse al manoseo y a la vagina artificial; en una semana ya puede estar entrenado; no se usa la electroeyaculación porque es algo traumática), Cuidados generales (desparasitarlos, identificarlos, etc.).        

* Preparación de los retarjos: como diagnosticar el celo en las ovejas no es tan fácil, debemos emplear otros animales. Operación: se les hace la deferentectomía, en la cual se le corta y saca un trozo de conducto deferente para impedir la producción de espermatozoides y que estos pasen a las vías genitales y premien a las ovejas. Se realiza una semana antes debido al post- operatorio (que es sencillo pero se deben evitar las miasis), y para evitar que queden espermatozoides en las ampollas de los deferentes (debido a esto se los puede dejar una semana, o se puede hacer lavado de los retarjos recolectando semen y haciendo un espermiograma, para verificar que estos son estériles). Se pueden hacer un solo corte medial, o dos cortes laterales, y el abordaje puede ser posterior (mejor localización de los deferentes pero mayor contaminación) o anterior. Al cortar el deferente, los bordes se doblan hacia fuera. El número de retarjos o de animales marcadores en general varía entre un 3 y 10%, dependiendo del tamaño de la majada que vaya a inseminar.  Más o menos calculamos que exista un animal marcador por cada 8 a 12 hembras en celo. Si los animales están sobrando, los marcadores se pelean y van a montar ovejas que no están en celo. Si faltan marcadores, las ovejas van a estar poco marcadas y van a tener una línea pequeña y de poco color.

Cuidados: deben estar en buen estado para reconocer a las hembras en celo.

Elección de la raza: Las razas mestizas o criollas parecen ser más activas sexualmente que las razas puras.

Otros animales marcadores: capones u ovejas a los que se les hace un tratamiento de androgenización. Tres semanas antes de comenzar el trabajo se les inyecta entre 100 y 200 mg de propionato de testosterona intramuscular como fase de inducción del comportamiento sexual activo. Se comportan igual que los retarjos, pero son más fáciles de obtener. Las ovejas deben estar fuertes. Luego de la fase de inducción y comenzado el tratamiento es conveniente hacer una fase de mantenimiento con una inyección de 100 mg si en la primera dimos 200, o 50 mg si dimos 100, semanal o cada 15 días.   

* Preparación de la majada: La preparo 60 días antes. Identificación: no es absolutamente necesario pero se puede hacer, y es conveniente verificar si hay alguna oveja que no puede llevar adelante una preñez; Refugo por edad; Correcto manejo parasitario y de la alimentación: es conveniente que vengan ganando peso, ya que este sirve para estimular la tasa ovulatoria. Debo tener en cuenta que tenga comida suficiente para los animales.

* Preparación del personal: inseminador y peones: ver si es necesario contratar con anticipación. También es necesario entrenar a esas personas o instruirlos en lo que queremos que hagan.  

* Material necesario: Vaginas artificiales (camisas de goma, aros de goma para sujeción, peras de goma para poner el agua caliente), Lubricante (carboximetilcelulosa), Termómetros (para medir la temperatura de la vagina artificial, que se hace poniendo la vagina de forma vertical y metiendo el termómetro por debajo), Vaginoscopio (pilas, lamparitas de repuesto), Pistola de inseminar (cánulas de vidrio, émbolos de repuesto), Termos, Conservadoras de espuma plast, Microscopio (portas, cubres, otros: cámara con contador, pipeta Pasteur; colorantes, pipetas, platina térmica), Jabón, Jabón de glicerina (neutro), Cepillos para tubos, copas y camisas, Agua destilada para enjuagar material de inseminación, Repasadores, Papel higiénico, Toallas de papel, Alcohol, Probetas 100cc o tubos de ensayo grandes (gradilla), Bandejas de plástico (o metal), Pinturas de marcar lanares de 3 colores (amarillo, rojo, azul)(aceite de linaza más tierra de color)(utilizo 3 colores para marcar cada 15 días porque así se si una oveja tiene 2 colores quiere decir que en la primera inseminación no quedó preñada), Cuaderno, libreta, hojas cuadriculadas para gráficas, Jeringas descartables, Varillas de vidrio y frascos de vidrio, Ampollas de diluyente (citrato de sodio 2,9%), Huevos frescos (de menos de 36 hs de puestos), leche descremada esterilizada. 

B) Trabajo de inseminación artificial:

* Comienzo del trabajo: el inseminador va al predio cerca del mediodía y revisa las instalaciones, mira las ovejas y los machos, etc. En la tarde pinta los retarjos o los animales marcadores y los suelta con la majada durante toda la noche.

* Detección del celo: como el periodo de celo de la oveja dura entre 1 día y 1día y ½, nos alcanza con hacer una sola detección al día. Algunos recomiendan una doble detección de celo en el día con doble inseminación para mejorar los resultados. En la mañana, se separaran aquellas ovejas que han sido marcadas.  Al resto de la majada se lo suelta para que esté tranquilo y coma. La oveja en celo se va a mostrar al macho y lo va a buscar, se pone de espaldas, mira para atrás, bala y mueve la cola. Aprovechando esto, podemos, en el caso que tengamos muchos animales para inseminar, poner además a los carneros en el potrero de al lado, siempre con un alambrado de por medio, para observar cuales son las ovejas que se acercan a estos.       

* Manejo de los retarjos:   

- pintura: tipo, color (en la primera quincena de trabajo, los pinto con un color claro, y luego cambio de color), lugar (los pinto con abundante cantidad de pintura desde el prepucio hacia el pecho 10 o 15 cm).    

- cambios de tiza    

* Manejo de los carneros: 

- cuidados: tenerlos en potreros con sombra, etc.

- frecuencia de extracción: podemos hacer una colección por día sin descansos o dos veces con un día de descanso a la semana. Si sacamos dos veces, deben pasar como mínimo entre 10 y 15 minutos entre cada una. Vamos controlando la calidad del semen.      

* Manejo de las ovejas: 

- Manejo diario en potreros y bretes: las ovejas van a estar en un potrero general amplio. Por la noche, para que los carneros no se cansen mucho caminando, las ovejas van a pasar en un potrero más chico. Al día siguiente, separo las hembras que fueron marcadas.

- Control del celo (frec.) 

- Descanso previo y post I.A.: Es necesario que las hembras tengan un descanso previo a la inseminación, para disminuir el estrés sobre los animales. No debe producirse estrés ni 2 horas antes ni después de la inseminación hasta los 8 primeros días.

- Reincorporaciones: toda la majada que inseminé debo reincorporarla a la majada de observación.

Mal manejo:

   Perro = stress = calor (aumento de hasta 2ºC) = baja fertilidad.

Ejemplo de manejo de instalaciones: poner esquema.

En el potrero 3 puedo poner la majada inseminada, y en la noche poner a los animales marcadores. Luego se las lleva a las mangas y bretes, y de allí al local de inseminar. Todas las ovejas que insemino durante una semana, las pongo en el potrero 1. En el potrero 2 pongo las ovejas inseminadas en la segunda semana. Al final de las 2 semanas, alguna oveja puede no haber quedado gestada y entrar en celo, entonces por la noche la pongo en el potrero 4, donde pongo a la majada y a los animales marcadores por la noche para que me detecten el celo. La noche del día 14 reincorporo toda la majada de la primera semana y me queda libre el potrero 1. En ese potrero pongo las ovejas inseminadas la tercera semana, y al final de esta, el día 20 o 21, reincorporo a aquellas que no quedaron preñadas.       

Si solo tengo 2 potreros, entonces puedo esperar 15 días, o colar la majada y separarla en 2. 

* Inseminación Artificial propiamente dicha: 

- Colección del semen: lo más importante es mantener una temperatura adecuada y estimular lo suficiente (ni más ni menos, porque esto hace que podamos perder el eyaculado o que este sea pobre). Podemos poner una horqueta delante de la oveja para que no se mueva hacia adelante. El pene se desvía con la mano izquierda.  

- Valoración: el volumen normal es de 0,8 a 1,2 ml; el semen de carnero es muy concentrado, 1 millón a 2 millones de espermatozoides por mm cúbico. Vamos a tener de 2 mil a 2500 billones de espermatozoides por eyaculado. La valoración microscópica la hacemos solamente una vez por semana.

- Dilución: 

- Diluyentes: 70% de citrato de sodio, 30% de yema de huevo fresco, con menos de 36 hs de puesto, leche larga vida a la que aplicamos el proceso de tindalización: la calentamos a 95ºC durante 10 min. Con este proceso destruimos unas proteínas llamadas lacteinas, que me destruyen los espermatozoides. 

- Técnica de la I.A.: - Cérvix-mucus: es muy importante obtener datos para hacer un reconocimiento directo del celo. Podemos fijarnos en la coloración del cérvix, que debe ser rojizo, edematización de la vulva y presencia de mucus y estado congestivo de la mucosa vaginal. Entonces, ante la duda de si una oveja está marcada o no, la aparto para corroborar mediante vaginoscopía. Cuando el celo está comenzando, el mucus cervical es claro, transparente como clara de huevo, filante, algo espeso. Hasta las 10 hs del celo, el mucus se hace más fluido y más abundante. Luego de las 10 hs de celo, se va invadiendo de leucocitos y se va poniendo estriado, con rasgos blancos, nuboso. Este mucus se va haciendo más amarillento, hasta que al final del celo se pone cremoso. Después de finalizado el celo, se pone más espeso y se pega al vaginoscopio, cuesta meterlo. Al día 6 o 7 del diestro el mucus es muy espeso, pegoteado en las paredes de la vagina, con algo de olor desagradable. En el diestro, la vagina está de color rosado pálido, brillante pero seca. En proestro volvemos a tener mucus cervical. La hembra que está apta para inseminar es la que tiene mucus transparente y abundante o mucus nuboso. Se dice que inseminando en la primera etapa del celo se logran mejores resultados de preñez.

El cérvix es muy intrincado, generalmente es muy cerrado. Se abre a la vagina formando una verruga o papila (es como un repliegue de color rojo), que en el 48% de los casos obstruye el canal cervical. La entrada del cérvix, puede producirse en el centro de la papila, o abrirse directamente en la base de la vagina o formar una roseta (en las hembras viejas con muchos partos). Cuando ubicamos a la oveja, tratamos de que el tren posterior quede más elevado, para que las vísceras se desplacen hacia delante.       

- Inseminación: Introducimos el vaginoscopio hacia dorsal. Con el instrumento de inseminación levantamos la papila e introducimos lo más adentro que se pueda en el cérvix sin lastimar.  

- Dosis: Antes de vaciar la dosis debemos apagar la luz del vaginoscopio, porque la luz mata a los espermatozoides. Además, antes de descargar, retiro un poco el vaginoscopio, para evitar que se produzca un vacío al retirar el instrumento y que la dosis de semen sea atraída hacia la vagina. El semen debe ser depositado lentamente, para que el semen avance lentamente por entre los pliegues del cérvix. La dosis debe ser de 25 millones de espermatozoides vivos. Algunos colocan esta dosis en 0,01 ml, pero el volumen es muy pequeño, entonces otros colocan entre 0,01 y 0,1 ml.

El carnero me dio 1 ml de semen, con una concentración de 1800 millones de espermatozoides. Tengo que ponerle 25 millones a cada oveja. Para saber cuántas dosis voy a obtener realizo una regla de 3 y obtengo un número x de dosis. El eyaculado de 1 ml lo tengo que trabajar en 0,05 ml, entonces, realizo otra regla de 3: en 1 ml hay x dosis, entonces en 0,05 ml hay z dosis. Voy a hallar cuanto le tengo que poner de diluyente para poder tener la dosis con el volumen que yo quiero.                         

                                      - Identificación de la inseminación: identifico a la oveja con un número según el día de inseminación en que fue inseminada. La oveja que repite su celo va a tener tantos números como repeticiones de celo haya tenido. La primera vez la marcamos en la paleta (a todos los animales del mismo día los marco en la misma paleta). Si volvemos a marcar, lo hacemos un poco más atrás.                        

C) Registros: *Planificación de campo

                      *Gráficas: - colectiva (Duran)

                                      - individualizada   

D) Fin del trabajo: - fecha fija  

                               - según planilla: me tiene que revelar que el 80% de las ovejas están gestadas, y que no hay más de un 20% de ovejas inseminadas en los últimos 18 días.

Texto: Gissel Escudero